Invia 型激光共聚焦显微拉曼光谱仪（英国雷尼绍公司）, 785 nm 固体激光器, 633 nm 气体激光器, 532 nm 固体激光器, CCD 多通道检测器; 载玻片; 双面胶; 玛瑙研钵; 单晶硅片。

莫达非尼对照品（European pharmacopoia reference sdandard, 购自北京北纳创联生物技术研究院）。

各取莫达非尼对照品和查获的药片样品约 0.1 mg, 分别研磨成粉末状。将粉末分别转移至载玻片上后压平, 将载玻片固定在拉曼显微镜样品台上备检。

激光波长：532 nm; 激光功率：10 mW; 扫描范围：100~2 000 cm^-1; 曝光时间：10 s; 采集次数：3 次; 物镜倍数：100× （数孔直径 0.85）; 扫描方法：面扫描/点扫描。

对于荧光背景干扰大的物质一般选择 785 nm 波长的激光器或者近红外波长的激光器。因拉曼散射强度与入射光波长的 4 次方成反比^[5], 故荧光干扰小的物质选择短波长的激光器可以得到较强的拉曼散射。激光功率一般在不烧蚀样品的前提下从小到大逐渐增加, 直至检测器饱和。较高的功率下样品的散射强度更大, 可减少背底的干扰。本文中经比较不同的激光器以及功率, 选择 532 nm 激光器和 10 mW 的功率得到的莫达非尼的拉曼光谱图较好。如图4、5所示。

图4

Fig.4

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	图4 三种不同激光器波长下莫达非尼标样的拉曼光谱图Fig.4 Raman spectra of Modafinil standard specimen under three wavelength-different lasers

图5

Fig.5

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	图5 三种不同激光功率下的莫达非尼标样的拉曼光谱图Fig.5 Raman spectra of Modafinil standard specimen under three power-different lasers

大部分样品的拉曼指纹区域一般在 100~1 800 cm^-1 左右, 莫达非尼在 3 000 cm^-1 左右也有拉曼位移存在, 如图6所示。印度 Selvaraj等^[4]使用 FT-Raman 在 3 000 cm^-1 也检测到莫达非尼的拉曼位移, 且强度较大, 但莫达非尼主要拉曼位移均在 100~2 000 cm^-1 内, 为减少样品扫描时间和兼顾特征拉曼位移, 本方法将扫描范围设定为：100~2 000 cm^-1。

图6

Fig.6

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	图6 莫达非尼标样在 100~3500cm-1 的拉曼位移分布Fig.6 Raman displacement-shifting distribution of Modafinil standard specimen at 100~3500cm-1

增加曝光时间和采集次数可以提高样品的拉曼信号强度, 但是会增加采样时间。本文用10 s的曝光时间和 3 次采集次数即可得到较佳的拉曼图谱。

一般在低放大倍数下搜寻颗粒, 高放大倍数下采集数据, 物镜倍数越高数值孔径越大得到的谱图质量越好。

对于莫达非尼标准物质, 用点扫描即可得到较好的拉曼图谱。因实际样品中莫达非尼含量较低, 为防止目标成分丢失, 采用低倍物镜下面扫描的方式扫描。面扫描后对于发现的目标物位置可以进一步点扫描以得到较佳的拉曼谱图。

白色药片中辅料主要成分为淀粉, 为探讨淀粉等辅料对莫达非尼的干扰情况, 将药片研磨成粉末后取适量用甲苯提取并高速离心, 上清液提取后的残渣干燥研磨成粉末后检验。辅料在三种不同波长激光器及10 mW功率下的拉曼光谱图如图7。

图7

Fig.7

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	图7 淀粉等辅料在三种激光器条件下的拉曼光谱图Fig.7 Raman spectra of starch and other excipients under three laser conditions

对上图 7分析可知, 淀粉等辅料在 100~2 000 cm^-1 范围内整体拉曼信号较弱, 出现的个别拉曼位移峰强度相对于莫达非尼标样的强峰相差约103 数量级, 故淀粉等辅料对莫达非尼的干扰基本可以忽略。比较三种波长的激光器下淀粉等辅料的拉曼谱图, 本文方法中使用波长 532 nm 作为莫达非尼的拉曼检测条件也是合适的。