GC/MS-TQ8030三重四级杆气相色谱/质谱联用仪（日本岛津公司）, 10-XC-88L医用低温箱（合肥市齐美电器有限公司）, PL2003-METTLER TOLEDO型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器〔上海〕有限公司）, KUBOTA2420型低速离心机（KUBOTA公司）。

甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮标准对照品（公安部物证鉴定中心提供）, SKF525A标准对照品1 mg/mL（美国Sigma公司）。乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、环己烷为分析纯。

分别准确配制甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮1.0 mg/mL的甲醇标准储备液, 置于-20 ℃冰箱中保存。分别取上述适量储备液, 用甲醇配成浓度为100 μ g/mL的混合标准溶液, 使用时稀释成所需浓度的标准溶液。准确量取SKF525A标准储备液, 用甲醇稀释成100 μ g/mL的内标标准工作液。

1.3.1 色谱条件

Rtx-5ms毛细管色谱（30.0 m× 0.25 mm× 0.25 μ m）, 柱温：初始温度100 ℃, 保持1 min, 升温速率10 ℃/min, 至280 ℃恒温10 min; 载气：He, 流量1 mL/min; 分流进样, 分流比101, 进样体积1 μ L。

1.3.2 质谱条件

EI电离源, 电子束能量70 eV, 离子源温度270 ℃, 接口温度270 ℃, 溶剂延迟测定时间2 min, 质量范围：40~450 aum, 扫描方式全扫描SCAN。

量取尿液1 mL, 顺序加入20 μ L内标溶液（100 μ g/mL）、15 μ L10%NaOH溶液及1.0 mL环己烷, 超声10 min混匀, 4 000 r/min离心5 min, 移取上清液200 μ L至进样小瓶, 1 μ L进样。

取适量尿液, 分别加入不同浓度的甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮混合标准溶液, 配制成1.0、5.0、10.0 μ g/mL不同浓度的尿液样品, 每个浓度平行做5份, 按1.4方法处理, 同时配制相应浓度的标准溶液, 计算绝对回收率和准确度; 在一天内早、中、晚各测一次, 连续测5 d, 计算日内和日间精密度（见表1）。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 尿液中三种毒品的回收率、准确度和精密度（n=5, $\overline{x}$± s） Table 1 Recoveries, accuracies and precisions of three drugs in urine （n=5, $\overline{x}$± s） 分析物 添加量/(μ g/mL) 绝对回收率 平均绝对回收率 准确度 精密度 测得值/( μ g/mL) 相对回收率 日内RSD 日间RSD 甲基苯丙胺 1.0 70.82%± 6.60% 83.60% 1.15± 0.02 114.63%± 2.18% 5.80% 1.90% 5.0 81.91%± 9.49% 5.52± 0.50 110.47%± 9.99% 4.24% 9.04% 10.0 98.21%± 7.60% 10.05± 0.59 100.50%± 5.82% 6.99% 5.79% MDMA 1.0 76.26%± 8.80% 87.61% 1.02± 0.07 102.02%± 6.69% 5.64% 6.6% 5.0 85.32%± 9.44% 4.94± 0.19 98.90%± 3.75% 3.79% 2.74% 10.0 99.59%± 9.74% 10.50± 0.26 105.32%± 2.59% 2.46% 6.86% 氯胺酮 1.0 72.30%± 8.27% 79.98% 0.97± 0.12 89.98%± 12.14% 9.17% 12.5% 5.0 72.94%± 9.46% 4.68± 0.65 93.58%± 12.97% 8.20% 13.9% 10.0 93.68%± 9.08% 9.97± 0.65 99.65%± 6.47% 6.12% 6.5%

表1 尿液中三种毒品的回收率、准确度和精密度（n=5, $\overline{x}$± s） Table 1 Recoveries, accuracies and precisions of three drugs in urine （n=5, $\overline{x}$± s）

取适量尿液, 分别加入不同浓度的甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮混合标准溶液, 配成3种毒品浓度为0.1、0.2、0.5、1、2、5、10 μ g/mL的加标尿样, 每个浓度平行做3份, 然后按照1.4样品前处理方法进行提取, GC-MS测定。以内标法做线性回归, 确定尿液中甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的回归方程, 以信噪比3︰1分别计算3种物质的检测限（LOD）。结果表明, 3种毒品在0.2~10 μ g/mL浓度范围内线性关系良好（表2）。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的工作曲线和检测限 Table 2 Working curves and detection limits of methamphetamine, MDMA and ketamine 分析物 线性方程 线性相关系数R2 线性范围 /(μ g/mL) 检测限LOD /(μ g/mL) 甲基苯丙胺 y= 0.3769x + 0.1149 0.998 2 0.2~10 0.15 MDMA y = 0.2426x - 0.0411 0.996 3 0.2~10 0.1 氯胺酮 y= 0.1634x + 0.0844 0.996 9 0.2~10 0.15

表2 甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的工作曲线和检测限 Table 2 Working curves and detection limits of methamphetamine, MDMA and ketamine

萃取溶剂和pH的选择：采用正交法用不同溶剂（乙酸乙酯、乙醚、氯仿、环己烷）及不同的pH（8、9、10、11、12）进行萃取, 考察尿液中甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的回收率。使用乙酸乙酯时, 甲基苯丙胺的回收率低于50%; 使用乙醚时, 3种毒品的回收率均低于50%; 使用氯仿时, 甲基苯丙胺的回收率低于50%; 使用环己烷时, 在pH=12时, 3种不同毒品的回收率都在60%以上。通过回收率实验, 考虑方法的安全和回收率高低, 萃取溶剂选择用环己烷。

取适量尿液, 分别加入不同浓度甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮毒品的混合标准溶液, 配制成高、中、低3种浓度（10.0、5.0、1.0 μ g/mL）的尿液样品, 每个浓度平行做5份, 按1.4方法处理, 同时配制相应浓度的标准溶液, 计算绝对回收率和准确度; 在一天内早、中、晚分别检测3次, 连测5 d, 甲基苯丙胺的平均回收率在83.60%, MDMA的平均回收率在87.61%, 氯胺酮的平均回收率在79.98%, 具体见表1。

测试样品准备：采集来自不同人群的尿液10人份, 分别编号为urine1~unrie10。进样顺序：进样时按照样品浓度从低到高的顺序, 每组中尿样添加毒品有8种不同的浓度分为LOD、2LOD、LOQ、1.5LOQ、2LOQ、4LOQ、6LOQ、8LOQ, 每个浓度平行5个样, 每组浓度下有空白试剂1个, 空白试剂加内标1个, 相应浓度的标准样1个。共测10组, 每组中每个样品进样1次, 1组共64个样品。

图1为3种毒品标准品及内标物的总离子流色谱图。保留时间作为定性的一个重要指标, 其包括绝对保留时间（RT）和相对保留时间（RRT）。相对保留时间为毒品与内标绝对保留时间的比值, 绝对保留时间的偏差（Δ RT）又分为绝对保留时间的绝对偏差和相对偏差, 相对保留时间的偏差（Δ RRT）又分为相对保留时间绝对偏差和相对保留时间相对偏差。

图1

Fig.1

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	图1 8LOQ时3种毒品标准品及内标的总离子流色谱图（从左至右依次为甲基苯丙胺RT=5.083min, MDMA RT=9.463min, 氯胺酮RT=13.296min, SKF525A RT=17.631min）Fig.1 Total ion chromatogram of three drugs’ standards and internal standard at 8 LOQ (from left to right, the RT time (min) of methamphetamine, MDMA, ketamine and SKF525A is respectively 5.083, 9.463, 13.296 and 17.631)

实验结果表明各浓度的标准差（SD）为0.006 4~0.015 2 min, 相对标准差（RSD）为0.06%~0.30%。可以认为实验室的3种毒品标准品的绝对保留时间在各浓度均比较稳定。3种毒品不同浓度标准品的RRT的标准差极小, 各浓度下相对标准差（RSD）为0.02%~0.24%。可以认为甲基苯丙胺、MDMA、氯胺酮对照品的RRT在各浓度均比较稳定。

图2~5给出了每种毒品在不同浓度下的出峰时间偏差, 各自的Δ RT统计结果示意图。用prism统计软件处理4800个数据。

图2

Fig.2

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	图2 尿样添加绝对保留时间RT的绝对偏差Fig.2 Absolute deviation of absolute retention time (RT) of the spiked urine samples

图3

Fig.3

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	图3 尿样添加绝对保留时间RT的相对偏差Fig.3 Relative deviation of absolute retention time (RT) of the spiked urine samples

图4

Fig.4

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	图4 尿样添加相对保留时间RRT的绝对偏差Fig.4 Absolute deviation of relative retention time (RRT) of the spiked urine samples

图5

Fig.5

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	图5 尿样添加相对保留时间RRT的相对偏差Fig.5 Relative deviation of relative retention time (RRT) of the spiked urine samples

国内2010年后通用的标准^{[17, 18, 19, 20]}对于离子比率偏差Δ I范围的要求均是引用欧盟EU:2002/657/EC标准, 但国内外的标准均未验证浓度对离子比率是否有影响。本实验选择甲基苯丙胺的特征离子碎片58、91、56、65; MDMA的特征离子碎片58、135、77、51; 氯胺酮的特征离子碎片180、182、209、152来进行全扫描模式下可靠性的研究。浓度对甲基苯丙胺、MDMA和氯胺酮的特征离子的离子比率具有一定的影响, 具体结果见图6~8。

图6

Fig.6

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	图6 甲基苯丙胺特征离子离子比率随浓度增长的变化趋势Fig.6 The ratio of characteristic ions of methamphetamine changing with the increased concentration

图7

Fig.7

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	图7 MDMA特征离子离子比率随浓度增长的变化趋势Fig.7 The ratio of MDMA characteristic ions changing with the increased concentration

图8

Fig.8

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	图8 氯胺酮特征离子离子比率随浓度增长的变化趋势Fig.8 The ratio of characteristic ions from ketamine changing with the increased concentration

特征离子离子比率偏差（Δ I）分为离子比率绝对偏差（Δ I绝对）和相对偏差（Δ I相对）, Δ I绝对是尿样添加的特征离子离子比率与标准品离子比率的差值。在本实验中, 剔除因实验操作等因素造成的不合理数据, 用prism统计软件处理3 223个数据, 得到标准品离子比率与尿样添加特征离子Δ I绝对统计图9。

图9

Fig.9

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	图9 标准品离子比率与尿样添加特征离子离子比率绝对偏差统计图Fig.9 Absolute deviation of characteristic ion ratio between standards and urine samples

Δ I相对是其Δ I绝对与Δ I标准的比值, 在本实验中, 剔除因实验操作等因素造成的不合理数据, 用prism统计软件处理3 058个数据里, 得到标准品离子比率与尿样添加特征离子离子比率Δ I相对统计图10。

图10

Fig.10

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	图10 标准品离子比率与尿样添加特征离子离子比率相对偏差统计图Fig.10 Relative deviation of characteristic ion ratio between standards and urine samples